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          技術文章

          多克隆抗體的免疫電泳操作流程

          時光:2016-08-03 閱讀次數:1303

          試驗道理

           

          免疫電泳又稱爲γ球卵白電泳或免疫球卵白電泳技術,這是一種可以或許斷定血液中三種免疫球卵白IgM, IgG, IgA含量程度的試驗辦法。在這項試驗技術中,起首應用卵白質的份子量和所帶電荷的比值應用程度瓊脂糖凝膠電泳技術將卵白質停止分別,然後將特異性的抗體引入到與電泳偏向平行的凹槽中,在抗原和抗體的分散過程當中,抗原和抗體恰當比例的聯合會招致沉澱的發生。0.85%鹽不只可以終止分散進程也可用于洗去未聯合的卵白,抗原和抗體聯合所構成的沉澱線便可以肉眼視察也可應用染色辦法視察。

          免疫電泳技術不只可用于血清或尿樣中單克隆抗體的判定,也可用于其它方面,好比免疫複合物的挑選、各類異常丙種球卵白血症的辨認和判定等。免疫電泳技術也是停止卵白質慣例評價的一種靠得住,的試驗辦法,可視察卵白質構造的變更和濃度的轉變。

           

          試驗試劑

           

          1. 程度電泳儀

          2. 打孔器

          3. 滴管

          4. 刀片

          5. 電源

          6. 水浴(55℃)

          7. 燒杯(400-600ml)

          8. 加樣槍(5-100μl)

           

          試驗設備

          1. 純化的抗體;卵白質混雜物;1%瓊脂。 
          2. Tris-巴比妥緩沖溶液:2.24g 巴比妥酸,4.43g Tris,0.053g 乳酸鈣及0.065g 叠氮化鈉溶于100ml 蒸餾水中。 
          3. 電泳緩沖溶液:將Tris-巴比妥緩沖溶液與蒸餾水按1:4的比例混雜。

          試驗步調

           

          1. 預備瓊脂糖凝膠

          將瓊脂和電泳緩沖溶液混雜放入90℃水浴加熱至熔解,制成1%瓊脂,將瓊脂在冷卻前鋪在程度玻璃板上,待冷卻至室溫後,按圖用內徑4毫米的打孔器打孔及制造凹槽。

          2. 電泳

          將用電泳緩沖溶液濃縮的4%-5%的抗原用滴管當心放入小孔中,將膠板放入電泳槽中並用潤濕的濾紙將膠板和電泳槽中的緩沖溶液相連。蓋上電泳槽蓋,接通電源,6V/cm通電至前沿挪動約35mm,時光約爲1小時,應用示蹤染料斷定挪動間隔。

          3. 分散

          將膠板移出電泳槽並放在程度地位上,用濾紙潤幹膠板凹槽中的緩沖溶液,在凹槽中參加過量的抗體(0.2ml~0.25ml),留意抗體不克不及溢出凹槽以免凈化.將膠板移至含有叠氮化鈉且有必定濕度的盒內,加蓋密封後在30℃水浴分散至多10小時後,移至0.85%鹽水中以終止分散並洗去未聯合的卵白。

          4. 視察抗原和抗體之間所構成的沉澱線,並停止記載。

           

          留意事項

           

          1. 免疫電泳剖析法的勝利與否,重要取決于抗血清的質量。抗血清中必需含有足夠的抗體,能力同被檢樣品中壹切抗原物資生成沉澱反響。

          2. 抗血清固然含有對壹切抗原物資的響應抗體,但抗體效價有高有低,是以要恰當斟酌抗原孔徑的巨細和抗體槽的間隔。

          3. 免疫電泳請求剖析的物資一方爲抗原,另外壹方爲沉澱反響性抗體。是以沒有抗原性的物資或抗原性差的物資、非沉澱反響性抗體,均不克不及用免疫電泳停止剖析。

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                  公司近况

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