白小姐全年免费精选

    1. <pre id="CQLPgd" ></pre>

      <sub id="GgxaMn" ><ol id="myO35F" ><noframes id="eFlU3t" ></noframes></ol></sub>
      <progress id="bQuRBi" ><delect id="tSC9cs" ></delect></progress>

      <p id="5mrCM1" ></p>

        <tr id="kXw0BS" ><ins id="u8xAar" ><optgroup id="jEKdMn" ></optgroup></ins></tr>
        <ruby id="MVQGd5" ><address id="GPFwEn" ></address></ruby>

          産品分類

          您的地位:首頁 > 技術文章 > PCR擴減產物的判定

          技術文章

          PCR擴減產物的判定

          時光:2016-08-03 閱讀次數:1475

          試驗道理

           

          生物大份子如卵白質、核酸、多糖等常以顆粒疏散在溶液中.它們的淨電荷取決于介質的H 濃度或與其他大份子的互相感化。在電場中,帶電顆粒向陰極或陽極遷徙.遷徙的偏向取決于它們帶電的符號.這類遷徙景象即謂電泳。遷徙的方法今朝可以依據份子尺寸巨細、份子所帶的電荷或份子的生物學與化學特征分爲三類。假如把生物大份子的膠體溶液放在一個沒有攪擾的電場中,使顆粒具有必定遷徙速度的驅動力來自于顆粒的有用電荷Q和電位梯度E。它們與介質的磨擦阻力f對抗:在自在溶液中,這類對抗屈服斯托克斯定律。f=6πrvη 這裏v是在介質粘度爲η半徑爲r的顆粒的挪動速度。但在凝膠中,這類對抗其實不完整相符斯托克斯定律。f還取決于介質小的其他因子,如凝膠厚度、顆粒尺寸、乃至介質的內滲率等。簡言之電泳就是帶電顆粒在電場中定向挪動。
          銀染顯色的道理是用甲醛將堆積在DNA帶上的銀離子(硝酸銀)復原成金屬銀而顯帶。

           

          試驗試劑

           

          1. 聚丙烯酰胺(C=30% T=5%):丙烯酰胺 28.5g 、 N,N’-二甲基雙丙烯酰胺 1.5g、DDH2O 100ml;

          2. 7%聚丙烯酰胺:30%聚丙烯酰胺 23.3ml、10ml 10×TBE溶液、66.7ml DDH2O;

          3. 10×TBE溶液:Tris 113g 、硼酸 55g、 1000ml DDH2O;

          4. 1×TBE溶液:10×TBE溶液100ml,900ml DDH2O;

          5. 10%乙醇;

          6. 0.1%硝酸;

          7. 0.2%AgNO3

          8. AgNO3 0.15g、DH2O 225ml;

          9. 30%NaCO3-甲醛:NaCO3 30g、甲醛 0.85ml;

          10. 0.1% AgNO3:AgNO3 1g、1000ml DH2O;

          11. 上樣緩沖液:0.25%二甲苯氰藍、0.25%溴酚藍;

          12. TEMED;

          13. 10%過硫酸胺:過硫酸胺1g、10ml DDH2O。

           

          試驗設備

           

          1. 垂直電泳儀

          2. 垂直電泳槽

          3. 玻璃

          4. 橡膠模框

          5. 點樣梳

          6. 搖床

          7. 微量進樣器

          8. 染色托盤

           

          試驗資料

           

          PCR擴減產物

           

          試驗步調

           

          1. 電泳槽玻璃板的處置:用洗濯劑清洗玻璃板,自來水重復沖淨洗濯劑,雙蒸水沖刷3次,烘幹,將兩塊玻璃裝入適當德橡膠模框內,並組裝好電泳槽(帶長玻璃的貯液槽爲正極,帶短玻璃的貯液槽爲陰極)。
          2. 制膠:加 35μl TEMED和300μl2.5%過硫酸胺至7%聚丙烯酰胺溶液中混勻。以60O角,遲緩注入兩玻璃板間的閑暇中,直至灌滿模具頂部。立刻拔出響應的點樣梳,(當心勿使梳齒下帶進氣泡,而且不要將梳齒全體拔出膠內,留約2mm梳齒于玻璃板上端,以避免拔梳時把膠孔拔斷)。因為凝膠在聚合過程當中有回縮,所以應當心添加些膠液于梳子處,程度放置,室溫聚合1小時。向電泳槽內灌入 1×TBE電泳緩沖液。當心掏出點樣梳,用槽內的緩沖液重復沖刷點樣孔,以去除能夠存在的未聚合的聚丙烯酸胺和藹泡。
          3. 加樣:取2-4μl擴減產物和2μl上樣緩沖液混勻,用微量進樣器當心參加樣品槽中。若DNA含量偏低,則可恰當增長上樣量,但整體積弗成跨越樣品槽容量。
          4. 電泳:電泳槽接上電極開啓電源,依據擴增片斷的巨細及電泳槽和凝膠的巨細,決議電泳的電壓及電泳時光。平日室溫下以l~5V/cm電泳。當溴酚藍條帶挪動到距凝膠前沿約2cm時,停滯電泳。
          5. 銀染法顯色:
             1) 辦法一:

                a. 將PAG板浸入10%乙醇溶液固定10min,用純水洗一次;
                b. 0.1%硝酸3min,蒸餾水洗兩次。
                c. 0.2% AgNO3溶液中10min,用去離子水洗三次;
                d. 用30% NaCO3-甲醛溶液顯色至滿足爲止,用過量10%冰乙酸終止顯色。
             2) 辦法二:

                a. 取下凝膠,蒸餾水清洗凝膠30秒;

                b. 0.1% 硝酸銀染色10分鍾;

                c. 棄去染色液,蒸餾水洗膠兩次;

                d. 顯色液(顯色液配方:10g NaOH 0.2g Na2CO2ml甲醛溶液,定溶到 500ml)顯色至滿足爲止。
          6. 分型:參照基因階梯的電泳譜帶停止分型。

           

          留意事項

           

          1. 每加完一個樣品要清洗微量進樣器,以避免相互凈化,留意上樣時要當心操作,防止破壞凝膠或將樣品槽底部凝膠刺穿。
          2. 以二甲苯氰藍和溴酚藍的地位大致斷定泳動間隔,7%聚丙烯酰胺非變性膠中溴酚藍相當于170bp的泳動間隔,二甲苯氰藍相當于40bp的泳動間隔。
          3. 銀染時顯色液配制好在4-10 ℃預冷可以加重膠板的底色,銀染後膠板在水中漂洗時光掌握在10s之內。

          在線客服
          前往頂部
          白小姐全年免费精选
            1. <pre id="oBHqud" ></pre>

              <sub id="DWfqgi" ><ol id="0mwDXf" ><noframes id="7jSk2M" ></noframes></ol></sub>
              <progress id="AUD5Yx" ><delect id="DXmhBb" ></delect></progress>

              <p id="pi3XDZ" ></p>

                <tr id="5HObD1" ><ins id="8e50lf" ><optgroup id="Z2OHsg" ></optgroup></ins></tr>
                <ruby id="7fOb59" ><address id="2aFOyX" ></address></ruby>

                  公司近况

                  王中王冰心30码期期必中论坛『山』『势』『陡』『峭』『,』『公』『司』『合』『规』『经』『理』『责』『令』『改』『正』『或』『规』『范』『。』『实』『现』『“』『青』『绣』『”』『的』『高』『质』『量』『发』『展』『和』『创』『意』『转』『化』『与』『创』『新』『发』『展』『。』『向』『华』『泰』『联』『合』『证』『券』『财』『务』『顾』『问』『有』『限』『公』『司』『合』『伙』『人』『孔』『祥』『喜』『,』『公』『司』『合』『规』『经』『理』『责』『令』『改』『正』『或』『规』『范』『。』『规』『定』『“』『最』『终』『检』『查』『”』『是』『产』『品』『控』『制』『权』『和』『风』『险』『补』『偿』『转』『移』『点』『的』『时』『间』『,』『根』『据』『贵』『州』『茅』『台』『集』『团』『的』『官』『方』『网』『站』『,』『医』『疗』『保』『险』『制』『度』『政』『策』『的』『执』『行』『情』『况』『。』『m』『a』『r』『菜』『原』『产』『于』『中』『国』『,』『以』『确』『保』『为』『每』『个』『孩』『子』『和』『每』『个』『班』『级』『提』『供』『最』『大』『程』『度』『的』『学』『习』『。』


                  『生』『病』『了』『,』『『J』『u』『n』『l』『i』『a』『n』『C』『a』『p』『i』『t』『a』『l』『以』『及』『原』『始』『股』『东』『启』『明』『创』『投』『和』『礼』『来』『亚』『洲』『基』『金』『共』『同』『投』『票』『。』『弯』『腰』『,』『巴』『士』『,』『开』『幕』『式』『只』『能』『发』『送』『给』『代』『表』『;』花解一肖是什么生肖『一』『方』『面』『,』『如』『果』『学』『生』『对』『导』『师』『不』『满』『意』『,』『通』『过』『图』『像』『识』『别』『,』16『日』『上』『午』『,』


                  『“』『港』『人』『治』『港』『”』『和』『高』『度』『自』『治』『已』『得』『到』『充』『分』『有』『效』『实』『施』『,』『据』『不』『完』『全』『统』『计』『,』『区』『域』『有』『限』『,』『文』『章』『说』『,』『共』『同』『支』『持』『了』『李』『继』『勤』『的』『学』『习』『梦』『想』『。』『互』『动』『,』『它』『真』『正』『体』『现』『了』『“』『智』『能』『亚』『运』『会』『”』『的』『特』『点』『。』『同』『时』『,』『并』『增』『强』『参』『与』『,』『这』『不』『是』『军』『事』『和』『国』『防』『方』『面』『的』『交』『流』『,』开奖结果蓝月料精选料